2.3.6 稳定性实验

称取样品粉末1.0 g，不同按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，树脂数鸡室温放置，环纹分别于0、血藤析和2、药材4、质量6、不同8、树脂数鸡13、环纹24 h进样测定，血藤析和结果显示染料木素、药材芒柄花素的质量RSD分别为1.02%、0.86%，不同表明样品在24 h内稳定。树脂数鸡

2.3.7 重复性试验

精密称取同一样品6份，环纹每份1.0 g，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，结果显示染料木素、芒柄花素的RSD分别为1.61%、0.76%，表明本方法重复性良好。

2.3.8 加样回收率实验

取已知含量的样品粉末6份，每份0.5 g，精密称定，分别加入染料木素、芒柄花素的对照品0.012 mg，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液进行测定。结果详见表4。
2.3.9 样品中芒柄花素、染料木素的含量测定
取样品鸡血藤粉末1 g，精密称定，每批药材平行3份，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液并测定，计算含量。结果见表3及图2。

由表3和图2可看出，除了从化居群1、2和4环样品，其他样品的醇溶性浸出物含量均能达到《中国药典》的规定（不低于8%）。梅州和从化居群的醇溶性浸出物都在3环达到峰值，变化趋势在4环之前基本一致，4环之后含量变化趋势不一致；惠州居群由于采样的限制，只采集到3、4、7、8和9环的样品，采样的环数不连续，故无法从1环开始分析其结果，但可看出3环到4环呈增加的趋势，7环以上的样品中醇溶性浸出物的含量基本保持稳定。同一植株具有不同的树脂环纹数的原儿茶酸含量差异较大，且不同居群样品中的变化趋势不一致。鸡血藤中儿茶素与表儿茶素的含量较高，不同树脂环纹数药材中的含量变化较为明显，二者的变化趋势基本一致，但不同居群样品中的变化趋势则不相同。芒柄花素与染料木素的含量变化差异较小，且具有较为一致的变化趋势（先下降再上升，幅度较小），二者的含量在不同居群来源样品中的变化趋势亦较为一致。

2.4 相关性分析

采用SPSS对环纹数与醇溶性浸出物及5个化学组分含量的数据进行正态性检验，由于芒柄花素数据不符合正态分布，故采用Spearman双变量相关性分析，相关系数见表5。

由表5可知，环纹数与醇溶性浸出物及5个化学成分的相关性均不显著。其中醇溶性浸出物含量与染料木素含量具有显著相关性，与芒柄花素含量具有极显著相关性；表儿茶素含量与儿茶素含量具有非常显著相关性，与芒柄花素具有显著相关性；染料木素与芒柄花素具有非常显著相关性。

结合含量测定结果与实地调查综合分析发现，鸡血藤环纹数与醇溶性浸出物及5个化学成分均无显著相关性，3环以上的树脂环中，芒柄花素、染料木素在植株中变化较小，而儿茶素、表儿茶素、醇溶性浸出物均较高，故3个树脂环以上的鸡血藤质量较好。

2.5 同一条藤茎不同树脂环纹数部位的鸡血藤HPLC指纹图谱研究

2.5.1 色谱条件

乙腈（A)～0.1%醋酸水溶液（B），梯度洗脱：0～25 min,10%～15%A;25～55 min,15%～25%A;55～95 min,25%～45%A;95～120 min,45%～70%A;120～130 min,70%～90%A;130～140 min,90%～100%A。柱温：25℃；进样量：10μL；流速：1 m L·min-1；运行时间140 min；检测波长：260 nm。

2.5.2 对照品溶液的制备

精密称取对照品原儿茶酸2.99 mg，芒柄花素2.10 mg，大豆苷元2.25 mg，儿茶素2.24 mg，染料木素2.46 mg，毛蕊异黄酮2.68 mg，表儿茶素2.37 mg，异甘草素1.09 mg，分别用甲醇定容于5 m L量瓶中，摇匀，作为贮备液。分别取原儿茶酸、芒柄花素、大豆苷元、儿茶素、染料木素、毛蕊异黄酮、表儿茶素及异甘草素对照品贮备液0.5 m L置10 m L量瓶中混合，用甲醇定容，摇匀，作为混合对照品溶液。对照品色谱图见图4。

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